Phusion 熱啟動(dòng)II高保真PCR聚合酶的優(yōu)勢(shì)

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

• 在室溫下構(gòu)建反應(yīng)
• 反應(yīng)構(gòu)建期間無非特異性擴(kuò)增和引物降解現(xiàn)象
• 借助熱啟動(dòng)技術(shù)，無需等待即可重新激活
• 高保真度 （52X Taq）
• 延伸時(shí)間短 （15-30 s/kb），可實(shí)現(xiàn)快速 PCR
• 反應(yīng)穩(wěn)健，幾乎無需優(yōu)化
• 可以盡可能少的酶用量實(shí)現(xiàn)更高的產(chǎn)物產(chǎn)率
• 可直接上樣至凝膠

Phusion 熱啟動(dòng) II 高保真 DNA 聚合酶由 Phusion DNA 聚合酶和可逆結(jié)合的特異性 Affibody 配體（可在室溫下抑制 DNA 聚合酶活性）混合而成，故在用其擴(kuò)增時(shí)不會(huì)產(chǎn)生非特異性產(chǎn)物。Affibody 配體還可抑制聚合酶的 3'→5' 核酸外切酶活性，從而防止在反應(yīng)構(gòu)建過程中引物和模板 DNA 降解。在促進(jìn)聚合酶活性的溫度下，配體得到釋放，使聚合酶活化。Phusion 熱啟動(dòng) II DNA 聚合酶在高溫下立即重新激活，因此不需要在 PCR 方案中單獨(dú)設(shè)置活化步驟。
Phusion Green 熱啟動(dòng) II 高保真 PCR 預(yù)混液為方便的 2X 混合物，旨在盡可能減少移液步驟。預(yù)混液含有 Phusion 熱啟動(dòng) II DNA 聚合酶、核苷酸和經(jīng)過優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液（包括 MgCl₂）。緩沖液還含有一種密度試劑和兩種示蹤染料，用于 PCR 產(chǎn)物直接凝膠上樣。

Phusion Flash 高保真 PCR 預(yù)混液和 Phusion Hot Start II 高保真 PCR 預(yù)混液有什么區(qū)別？

Phusion Hot Start II 高保真 PCR 預(yù)混液是一種基于 Phusion Hot Start II DNA 聚合酶的 2X 即用型溶液。它專為最高保真度（52X Taq）和特異性而設(shè)計(jì)。Phusion Flash 高保真 PCR 預(yù)混液基于改良的 Phusion 熱啟動(dòng) II DNA 聚合酶，可實(shí)現(xiàn)極短的循環(huán)時(shí)間，并具有較低的保真度 （25X Taq）。

Phusion Hot Start II 高保真 PCR 預(yù)混液中使用哪種緩沖液？

Phusion 熱啟動(dòng) II 高保真 PCR 預(yù)混液基于 Phusion HF 緩沖液。為了擴(kuò)增富含 GC 的靶標(biāo)，我們建議添加 3% DMSO。

Phusion Hot Start II 高保真 PCR 預(yù)混液中的酶濃度是多少？

Phusion Hot Start II DNA 聚合酶濃度經(jīng)過優(yōu)化，可在大多數(shù)反應(yīng)中獲得良好的結(jié)果。當(dāng)按照說明設(shè)置PCR反應(yīng)時(shí)，Phusion酶的最終濃度為50μL反應(yīng)中的1U（20μL反應(yīng)中的0.4U）。

Phusion DNA 聚合酶是否添加非模板依賴性 3'-A 突出端？

Phusion DNA 聚合酶產(chǎn)生鈍的最終產(chǎn)物;因此，建議進(jìn)行鈍端克隆。如果需要 TA 克隆，可以通過在鈍 PCR 產(chǎn)物中添加 A 突出端來進(jìn)行，例如 Taq DNA 聚合酶 （Cat.不。EP0401）。然而，在添加突出端之前，通過仔細(xì)純化 PCR 產(chǎn)物來去除所有 Phusion DNA 聚合酶非常重要，因?yàn)?Phusion DNA 聚合酶中的校對(duì)活性非常強(qiáng)。任何剩余的 Phusion DNA 聚合酶都會(huì)降解 A 突出端，從而再次產(chǎn)生鈍端。

Phusion DNA 聚合酶可以以 1 秒/kb 的速度延伸嗎？

是的，這是可能的，尤其是在擴(kuò)增較小的擴(kuò)增子時(shí)。Phusion DNA 聚合酶的合成能力是 Pfu 的 10 倍。我們建議將 Phusion Flash PCR 預(yù)混液的延長(zhǎng)時(shí)間延長(zhǎng)至 15 s/kb。15 s/kb 是一個(gè)保守的值，我們可以承諾幾乎可以與任何擴(kuò)增子一起使用。在許多情況下，可以使用明顯更短的延伸時(shí)間 （0-5 s/kb），而不會(huì)影響產(chǎn)量。Phusion Flash DNA 聚合酶與其他快速聚合酶的區(qū)別在于，PCR 方案中的所有步驟都可以縮短，包括退火和變性。與任何其他聚合酶相比，這導(dǎo)致了極快的方案。